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¿Que se busca en un análisis de secuencia de genomas microbianos?
Virulencia, adaptación al hospedador y evolución
¿Que implica la secuencia genómica?
Secuenciar una librería de fragmentos del genoma, ensamblaje, relleno, localización y predicción de genes.
Esto ofrece un repertorio de los factores de virulencia e inmunógenos potenciales.
¿Que se obtiene en un análisis de la diversidad?
Variable del contenido cromosómico, contenido GC,descripción genética y mecanismos de diversidad y virulencia.
Mecanismo de diversificación de la virulencia muy documentada entre patógenos entéricos...
Transferencia lateral de genes
Transformación, conjugación, transducción y recombinación. Implica la transferencia de 5-100kb
Como se le conoce a un mecanismo de transferencia cuando contribuye a la virulencia? Menciona sus ejemplos
PI (pathogenicity islands).
Sistemas de secreción tipo 3 y 4.
Generalizaciones del decaimiento genómico
La perdida aumenta con la adaptación al hospedador
Incremento del uso de procesos celulares del hospedador
Fenómeno evidente en parásitos intracelulares.
¿Que es una variación de fase?
La perdida o ganancia reversible de características fenotípicas como resultado de cambios de expresión de uno o varios genes.
¿¿que es una variación de antigénica?
La variación de las estructuras superficiales del microorganismo patógeno
Mecanismos de variación de fase y antigénica
Deslizamiento de una cadena por mal apareamiento de las bases, genes de contingencia, son exclusivos de patógenos de mucosas con genomas pequeños, asociados con la síntesis de estructuras de la superficie o con genes modificadores del ADN, tracts homopolimericos y la duplicacion de genes.
Consecuencias de la variación de fase y antigénica
Afectar a la expresión , cambios fenotípicos, escape de los mecanismo de defensa del hospedador.
Mecanismos de genómica funcional
Análisis de la activación de genes, análisis de transcriptomas y análisis de proteomas.
Principio básico de la localización de genes en la genómica funcional
Los genes que expresa un organismo patógeno en su ambiente difiere de los genes que expresa en su etapa patógena
Cual fue el primer ácido nucleico en ser secuenciado?
El tARN Ala de levadura.
Mecanismo de Sanger para secuenciación de ARN y ADN
MArcar con P32 para detectar en autoradiografias.
Estrategia básica de la secuenciación de ácidos nucleicos
Degradación especifica y fraccionamiento de los polinucleotidos, secuenciacion, ordenamiento por repaticion de los pasos anteriores con traslape de corte.
Describa el método enzimático de Sanger
Usar ADN polimerasa para sintetizar ADN con una terminación especifica, se generan frangmentos distinguibles, se agregan nucleotidos sin -OH en su 3´ ddNTP para obtener una terminacion especifica. Los ddNTPs se incorporan al zar obteniendo fragmentos de todos los tamaños posibles con terminacion de un residuo especifico.
Ejemplo de los primeros secuenciadores
ABI 370
Quien realizaba la secuenciacion por síntesis?
Solexa/ilumina
Roche 454 pirosecuenciacion
polimerasa, sincrónica, basada en ensamble
ABi secuenciacion por ligacion
Ligasa, sincronica basada en ensamble
Secuenciacion por semiconduccion
Ion torrent
Enumera los metodos de secuenciacion del mas efectivo al menos efectivo
sanger, 454, illumina, solid y helicos.
Aplicaciones de las tecnologías de secuenciacion por De novo Genome Assembly (454 o Illumina)
Metagenómica,secuenciacion desde ambiente, clasificación taxonómica y perfil metabólico.
Aplicaciones de las tecnologías de secuenciacion por RNA-SEq MApping Illumina/solid
identificar expresion diferencial, secuenciacion de transcriptoma en diferentes condiciones. SNPs e isoformas
Aplicaciones de las tecnologías de secuenciacion RNA –Seq De novo (Illumina)
Identificacion por expresión diferencial, secuenciacion del transcriptoma en diferentes condiciones, reconstruccion de trascriptoma de un organismo, condicion especifico.
Métodos para el análisis de la activación de genes
IVET: In vivo expression technology
DFI: Differential fluorescence induction
STM: Signature -tagged mutagenesis
GAMBIT: Genomic analysis and mapping by in vitro transposition
métodos para Análisis de Transcriptomas
DNA chips o micro-arrays
SAGE: Serial analysis of gene expression
DD:Differential display
métodos para Análisis de Proteomas
2D PAGE
Espectrometría de masas
Protein micro-arrays