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8 Cartas en este set
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Técnicas que estudian proteínas
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Conservando la estructura: Técnicas histológicas o inmunohistoquímica
Sin conservarla: Fraccionamiento Subcelular, estudios bioquímicos o WesternBlot |
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Inmunohistoquímica
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localización de un componente químicoy proteínas específicas en el tejido o célula. También permite cuantificar las células que expresan dicho componente.
Reacción Antígeno - Anticuerpo La indirecta es + habitual |
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Fraccionamiento Subcelular
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Para separar distintos componentes celulares
Ruptura mecánica → Homogenato→ Centrifugación → Pellet y Sobrenadante Luego uso enzimas específicas de cada organela y genero una reacción bioquímica; u observo la morfología de la Fracción x microscopio electrónico Es necesaria para WesternBlot |
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WesternBlot
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Determinar niveles de expresión de una proteína a traves de fraccionamiento subcelular u homogenato.
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PCR punto final
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Amplificación de un fragmento de ADN in vitro
Es específica Se hace electroforesis |
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QPCR
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Cuantificar moléculas de ARN.
Extracción de ARNm monocaternario→ Retrotranscripción → ADN complementario bicaternario. veo resultados en tiempo real,porque agregamos al tubo una proteina intercalante fluorescente (SYBR ) que marca Ios ADN doble cadena. |
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Técnicas de recombinación del ADN
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Enzimas de restricción → corte de 2 moléculasde ADN distintas con misma edonucIeasa → bordes pegajosos→ molécula híbrida
Vectores → amplifica porción de ADN sin PCR Porción = inserto Elemento que se autorreplica= Vector (Plasmidos, virus, levaduras, etc.) . Sirve si quiero saber la ubicación de una proteina = reemplazo de inmunohistoquímica → fusión de gen de proteina de interés con gen que identifico. También sirve si quiero saber la función de una proteina Permite obtener animales Transgénicos |
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CRISPR/CAS
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Simplifica la producción de Animales Modificados genéticamente (transgénicos)
Es + utilizada |
