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qué son las técnicas citológicas e histológicas
conjunto de procedimientos que permiten preparar células, tejidos o fracciones celulares para su reconocimiento o estudio.
cuáles son las técnicas a utilizarse
técnicas corrientes y técnicas especiales
para qué sirven las técnicas corrientes
para el examen inmediato o para el examen mediato
qué es el examen directo o inmediato
Un examen que permite que las células, como por los espermatozoides, las células sanguíneas , las células descamadas, los seres unicelulares y pluricelulares inferiores, puedan examinarse directamente al microscopio óptico.
cuáles son las coloraciones usadas en el examen directo o inmediato
coloración vital y supravital
qué es la coloración vital
cuando se introducen el organismo vivo sustancias atóxicas a fin de que se tiñan algunas células
cuáles son los tres tipos de coloración vital
azul tripan, azul pirrón o Carmín
para qué se utiliza la coloración vital
para apreciar cortes de tejidos frescos que contengan células en el colorante incorporado
qué es la coloración supravital y cuáles son sus tipos
consiste en extraer células vivas de un organismo y fuera de este colorearlas usando los colorantes atóxicos.
Rojo neutro, azul de metileno y verde janus
cuál es el equipo ideal para el examen inmediato
microscopio de contraste de fases o el de interferencia
Cuándo se da el examen mediato
cuando los tejidos y órganos se cortan en láminas finas y se someten a la acción de los colorantes.
cuáles son las etapas que se aplican para la microscopía óptica
1. obtención de la muestra
2. fijación
3. corte
4.coloración y montaje
obtención de la muestra
cuando se extirpan pequeños trozos de tejido vivo que no tiene un espesor mayor de 1 cm
fijación
Es un procedimiento por el cual el tejido se conserva en condiciones muy similares a las que tenía en vida
cuáles son los fijadores más utilizados
el formol en solución al 10%, el alcohol absoluto y las mezclas fijadoras
cuáles son los dos tipos de mezclas fijadoras
1. el fijador de bouin (ácido acético, ácido pícrico, formol)
2. el Zenker (bicarbonato de potasio, bicloruro de mercurio, ácido acético)
en qué radica la acción de los fijadores
radica en la coagulación de las proteínas ya que aumenta la consistencia de los tejidos y se inactivan las enzimas
qué son los mordientes
sustancias que favorecen la coloración posterior presente en algunos fijadores
corte
consiste en obtener láminas muy delgadas de 5 a 10 micras de espesor con un aparato llamado microtono
qué se debe hacer antes de realizar un corte
endurecer y darle consistencia a los tejidos
cuáles son los materiales más usados para darle cohesión a los tejidos
la parafina, la celulina y en algunos casos la gelatina
cuáles son los pasos para realizar un corte con previa inclusión en parafina
a. deshidratación de la muestra fijada
b. aclaramiento
c. inclusión en parafina
d. confección de los bloques
a. deshidratación de la muestra fijada
los tejidos sacados del fijador se lavan en agua corriente y luego se deshidratan pasándolos por alcoholes de graduación creciente, de 50%, de 95% y de 100%.
La deshidratación debe ser gradual para evitar alteraciones estructurales
b. aclaramiento
una vez que la muestra está deshidratada se introduce en una sustancia misible en alcohol y que disuelva la parafina, cómo el xilol y el cloroformo.
al cabo de unas horas el aclarante penetra al interior del tejido y se desplaza por completo el alcohol
c. inclusión en parafina
se debe introducir la muestra en un depósito con parafina líquida (58°C)
d. confección de los bloques
se coloca parafina en moldes especiales y en ellos se introduce la muestra orientada en el sentido que se desea cortar y se deja solidificar de esta manera se obtiene el bloque, listo para ser cortado
coloración
los cortes colocados en una lámina portaobjetos y adheridos a la misma mediante albúmina de huevo son coloreados según las necesidades de la observación
cuál es la tinción más utilizada
la hematoxilina eosina
cuáles son los pasos a seguir para la coloración con hematoxilina eosina
1.desperafinado de los cortes
2.hidratación gradual
3.coloración con hematoxilina
4. lavado en agua corriente
5. coloración con eosina
6.la deshidratación gradual
7. aclarado en xilol
8. el montaje
Desparafinado de los cortes
mediante el xilol la parafina que sirvió para permitir el corte, debe ser retirada para que penetra el colorante
hidratación gradual
con el acohol de 100%, de 95%, agua destilada
coloración con hematoxilina
tiene los núcleos de color azul o púrpura oscuro
lavado en agua corriente
retira el exceso de colorante y cambia el tono del color (viraje)
coloración con eosina
tiñe el citoplasma de color rosado
deshidratación gradual
alcoholes de 95% al alcohol de 100%
montaje
Se aplica bálsamo de Canadà (resina disuelta en xilol) sobre el preparado todavía humedecido por el xilol y luego se coloca una laminilla cubre objetivos, se presiona y deja secar.
cómo se llama las sustancias de las células o tejidos que tienen afinidad por los colorantes ácidos (eosina, anaranjado G, fucsina ácida)
acidófilas
cómo se llaman las sustancias de las células o tejidos que tienen afinidad por los colorantes básicos (fucsina básica, safranina,verde de metilo, hematoxilina de Harris, etc)
basófilas
técnica para la preparación a usarse con el microscopio eléctrico
a. obtención de las muestras
b.fijación
c. corte
d. coloración
obtención de las muestras
deben ser muy frescas y no deben transcurrir más de 4 minutos desde que se retiran del organismo ya que pueden producirse cambios estructurales
fijación
las muestras a fijarse deben ser muy pequeñas en forma de cubos de 1 a 2 mm de lado
cuáles son los fijadores más usados
tetraóxido de osmio y el glutaraldehido
corte
los cortes deben tener un espesor de 20 a 100 nanómetros y para lograrlo se utilizan los ultramicrótonos que están previstos de cuchillas de vidrio o de diamante
coloración
se da este nombre al tratamiento del corte con vapores o soluciones de metales pesados como el acetato de uranilo o el hidróxido de plomo
cuáles son los fijadores que también pueden actuar como colorante
el ácido ósmico y el ácido fosfo-túngstico
qué sucede cuando se utiliza el sombreado con vapores de oro o platino
se unen a diferentes compuestos de las células y tejidos los vuelven más opacos a los electrones
cuál es el primer paso de de la técnica congelación o fractura
congelación de la muestra en freón o nitrógeno líquido a temperaturas menores de -100 grados a -155 grados
cuál es el segundo paso de de la técnica congelación o fractura
fractura del tejido utilizando una cuchilla u hoja de afeitar generalmente la fractura ocurre a nivel de las membranas celulares
cuál es el tercer paso de de la técnica congelación o fractura
sublimación al vacío del agua congelada que se encuentra a nivel de la superficie expuestas dejando un dibujo en bajo relieve
cuál es el cuarto paso de de la técnica congelación o fractura
cubrir las superficies con un depósito delgado de platino y carbón, lo que produce que los vapores de metal sean nebulizados desde determinada dirección lo que produce un efecto de sombreado.
cuál es el quintopaso de de la técnica congelación o fractura
colocar la muestra en ácido clorhídrico con el fin de destruir la sustancia orgánica, quedando únicamente la película metálica que se examina al microscopio eléctrico
cuáles son las técnicas para observar células vivas o estudiar funciones de sus componentes
exteriorización y transluminación de órganos
cámaras transparentes
cultivo de células
micromanipulación y microcirugía