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PREPARACIÓN CORTES HISTOLÓGICOS
- Fijación
- Inclusión
- Obtención secciones
- Coloración/Tinción
FIJACIÓN
FÍSICA: calor (bacterias, fijación rápida) y frío (criofijación, -70ºC y rápida para no formar cristales de hielo, nitrógeno líquido)
QUÍMICA:
-Fijadores entrecruzantes: entrelazan las proteínas mediante formación de puentes metilénicos. FORMOL (aldehídos)
-Fijador oxidante: oxidan y forman puentes. TETRAÓXIDO DE OSMIO: se une a los dobles enlaces y bloquea los grupos amino. O Celular potásico.
-Fijadores precipitantes: ETANOL, desnaturaliza las proteínas: coagula las proteínas, pierden estructura porque se retira agua alterando enlaces hidrofóbicos e hidrofílicos.
-Fijadores ácidos: coagulan ácidos nucléicos, ácido acético
FIJACIÓN
- INMERSIÓN
- PERFUSIÓN
INCLUSIÓN
Endurecer un tejido, para:
- MO: PARAFRINA
- MET: RESINAS
1º quitamos agua, añadimos silol que ayuda a la parafrina a entrar y ya se introducen.
COLORANTE
Compuesto químico que proporciona color.
Vitales: azul de metileno
No vitales: tejidos ya fijados
-Hemotoxilina (H): colorante básico que se una a componentes ácidos (núcleo)
-Eosina (E): colorante ácido que se une a componentes básicos (citoplasma)
-Mezcla (H-E): tiñe compuestos ácidos y básicos.
CITOQUÍMICA
Identifica y localiza los componentes químicos en las células tanto de forma cualitativa como cuantitativa.
POR REACCIONES QUÍMICAS ANALÍTICAS: se utilizan reactivos que se unen al compuesto que queremos localizar. Reactivo de Schiff: (fucsina + ácido sulfuroso) se une específicamente a grupos aldehídos libres.
En la célula, grupos aldehídos son de 3 tipos:
-Libres en el citoplasma: REACCIÓN PLASMAL
-Los que se originan en polisacárido, con ácido peryódico oxidan grupos alcohol: REACCIÓN DE PAS
-Los que se originan en el ADN después de una hidrólisis ácida (HCl) que extrae las purinas: Reacción DE FEULGEN
INMUNOCITOQUÍMICA
Anticuerpo secundario se une a enzima (HRP) a la que se une compuesto DAB que es incoloro, pero al añadir agua oxigenada, forma un precipitado cristalino de color marrón y denso a los electrones (MO y MET)