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¿Qué es la hibridación artificial?
Unión de ácidos nucleicos monocaternarios en bicaternarios por complementariedad de bases.
¿Qué es un cultivo in vitro?
Recuperación de microorganismos a partir del hábitat natural en el que se encuentra a medios artificiales que cubran sus requerimientos artificiales
¿Qué son las enzimas de restricción?
Enzimas que catalizan la ruptura de los ácidos nucleicos
¿Qué es la desnaturalización?
Proceso de separación de las cadenas de ADN mediante la aplicación de temperatura o álcalis produciendo la ruptura de los puentes de hidrógeno
¿Qué son las sondas génicas?
Fragmentos de ADN/ARN marcados con moléculas reporteras como radioisótopos, permite identificar genes 15-30b, obtenidos a partir de síntesis química o plásmidos clonados
¿para que sirve el southern blot?
al hibridar fragmentos de ADN separados por electroforesis se puede caracterizar molecularmente a los virus
¿Que caracteristicas presenta el Northen blot?
se usa ARN sin enzimas de restricción
pasos para realizar el southern o Northen blot
extracción de ADN
digestión con enzimas de restricción
electroforesis con gel de agarosa
transferencia de membrana de nylon
incubar con sonda cADN marcada con 32P
exposición a RX
técnica del dot/slot blot
el material genético se palica directamente a la membrana son realizar electroforesis
se fija al vacío en molde con porcillo en forma de punto o lineal
se realizan detecciones cuantitativas con diluciones
Técnica del PCR
se usa Taq polimerasa, se usa ADN, primers, nucleótidos y polimerasa, en un termociclador.
descubierta por Kary Mullis en 1985
técnica de hibridación in situ
fijación del tejido con formalina y parafina, adherencia del tejido al porta, penetración con HCl y proteinasa K, postfijacion con formaldehido e hibridación
Aplicaciones del PCR
Clonar un gen de interés
herramienta de construcción plasmidica
construcción de genes sintéticos
detección de expresión de un gen
Pasos para realizar una PCR
Desnaturalización a 95°C
55-65°C unión de cebadores
72° Taq polimerasa agrega los nucleótidos
se duplica la secuencia
32-34 ciclos
que es un primer, cebador o iniciador
secuencia de ADN de cadena simple para PCR , se conocen como oligonucleótidos
que es una endonucleasa
enzimas de restricción que cortan el enlace fosfodiester, pueden ser inhibidas si hay contaminación, presencia de DNAasas o metilación.
Se necesita 10% de buffer
corte asimétrico, dejando extremos complementarios
cohesivo
corte que genera dos extremos de doble cadena
romo
que es un esquizomero?
Enzimas aisladas de diferentes bacterias que tienen la misma secuencia de reconocimiento pero generan productos distintos
Tipos de ER
1 y 3 requieren ATP para moverse, cortan regiones distales a la secuencia de restricción
2 corte próximo a la región de restricción, requieren Mg
cómo se nombra una ER
se toman las 3 letras del género y especie, otra letra indica el serotipo y el número romano que las identifica
Usos de las ER
Resistencia a plaguicidas
factores de crecimiento
tratamientos (insulina, anticoagulantes)
diagnóstico de enfermedades, forenses y criminología
que es un vector?
medios para desplazar ADN a un elemento genético sencillo, pequeño y manipulable, como un plásmido o un virus.
que es el ADN recombinate?
moléculas de ADN que contienen ADN de dos procedencias
tipos de clonación
génica, reproductiva y terapéutica
herramientas del ADN recombinante
ER
ADN ligasa
PCR
ADN sintético