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Son heces que se examinan antes de los 30 minutos después de la recolección
Heces liquidas
Son heces que se examinan antes de los 60 minutos después de la recolección
Heces poco consistentes
Son heces que pueden examinarse 24 horas después de su recolección
Heces sólidas
Que NO se le debe hacer a la muestra de heces para evitar que se deterioren con rapidez
Congelarse
Descongelarse
Incubarse
Ventajas y usos de los conservantes
USOS
-Conservan por varios meses
-Facilitan el transporte
VENTAJAS
-Conserva la morfologia de protozoarios
-Previene el desarrollo de huevos y larvas
Necesitan una eliminación adecuada
Compuestos mercuriales
El éxito o fracaso al diagnosticar enfermedades parasitarias depende de ________.
El manejo de los productos biológicos
Características de las muestras que NO sirven para observaciones o estudios y que conducen a resultados erróneos o falsos
-Mal recolectadas
-Conservadas inadecuadamente
-Con mucho tiempo de obtención
Qué formas parasitarias conserva el formol al 5%
Quistes de protozoarios
Huevos y larvas
Strongyloides, Ancylostoma o Necator
Cuando se usa formol al 5%
Cuando se desconoce el contenido parasitario
Diferencias entre formol y formalina
Formol: agua destilada

Formalina: solución salina fisiologica
Ventajas del formol al 10%
Alta disponibilidad
Mucha caducidad
Conserva ejemplares adultos
Muestras adecuadas para distintos procedimientos
Qué formas parasitarias conserva el formol al 10%
Huevos de helmintos
Larvas
Quistes de protozoos
Coccidios
Qué otras muestras se pueden conservar con el formol al 10%
Expectoración
Parásitos adultos
Tejidos
Especímenes completos
Menciona las desventajas del formol al 10%
Las muestras no se pueden teñir con tinción tricromica.
No conserva morfología de trofozoitos
No apto para PCR
Por qué se prefiere el formaldehido al 5% en lugar del formol al 10%
Porque es menos perjudicial para protozoos y emite menos vapores
Qué es el MIF
Solución merthiolate-iodo-formaldehido
Ventajas del MIF
Fija y colorea quistes y huevos de parásitos
Permite observación inmediata
Sencilla y perdurable
Adecuada para metodos de concentración
Desventajas del MIF
No adecuado para tinciones tricromicas
No conserva morfologia de trofozoitos
El yodo interfiere en otras tinciones, fluorescencia y distorsiona protozoos.
Qué es PAF
Solución fenol – alcohol – formol
Para qué se usa el PAF
Conserva hasta 6 meses
Trofozoitos y quistes de protozoos
Huevos y larvas de helmintos
El material previamente preservado con _____ se puede utilizar para hacer lecturas inmediatas con y sin tinción temporal.
PAF
Qué es el SAF
Solución de acetato de sodio - ácido acético-formaldehído
Ventajas del SAF
Facil de preparar
Mucha caducidad
Adecuado para tinciones (ácido alcohol resistencia, safranina y cromótropo)
No interfiere en los equipos de inmunoanalisis
No contiene cloruro mercúrico (toxico)
Conserva ejemplares adultos
Desventajas del SAF
Necesita albumina-glicerina para adherirse
Tinciones permanentes inferiores
Qué es el PVA
Solución fijadora de alcohol polivinílico
Ventajas del PVA
Fija y preserva trofozoitos y quistes de protozoarios
Adecuado para tinciones tricromicas permanentes
Conservación y adherencia de las formas parasitarias
Estabilidad por meses
Desventajas del PVA y del metodo de Schaudinn
Conservacion inadecuada de huevos, larvas, coccidios y microsporidios
Desecho toxico y costoso (cloruro de mercurio)
Dificil de preparar
No util en concentración o equipos de inmunoanalisis
Inadecuado para tinciones
Metodo de Schaudinn (Necesita albumina-glicerina para adherirse)
Ventajas del fijador de Schaudinn
Buena conservación de trofozoitos y quistes
Preparación facil de frotis con tinción permanente
Desventajas del fijador de Schaudinn
Desecho toxico y costoso (cloruro mercurico)
Para qué se utiliza la glicerina al 50% y cuál es su desventaja
Conservador de huevos
Aclara demasiado quistes y trofozoítos
Ventajas de la solución de dicromato de potasio
Útil para coccidios, esporulacion y crecimiento bacteriano
Desventajas de la solución de dicromato de potasio
No es fijador
En muestras de orina y exudados vaginal y uretral se utilizan conservadores
¿Sí?
¿No?
Y ¿por qué?
No, porque son muy lábiles, de preferencia se harán los estudios de inmediato.
Qué es el AMS III y para qué muestras se usa
American modified service
Para secreciones o fluidos
Con qué se conserva la sangre cuando se trasporta de un lugar a otro y corre el riesgo de descomposición
Azida de sodio
Cuál es la función de la azida de sodio
Conserva inhibiendo el crecimiento de hongos y bacterias
Con qué se conserva la sangre cuando se trasporta de un lugar a otro y NO corre el riesgo de descomposición
Anticoagulante
Menciona los 5 anricoagulantes y sus características
1. Mezcla de oxalatos (económico y universal)
2. Citrato de sodio o potasio (económico y universal)
3. EDTA (volumen inalterado)
4. Heparina (conserva volumen)
5. Desfribinación (pierde volumen)
Para que se utiliza el líquido fijador es formaldehido al 10%
Conservar tejidos
Que parásitos fija la solución de picromato (Bouin o Bowin) y el formol al 5% modificado
larvas de Strongyloides, Ancylostoma o Necator
Qué se le hace a los gusanos (helmintos adultos) recogidos de las heces
Son lavados en solución tibia de cloruro de sodio agitándola para estimular la relajación luego se examinan en fresco o son destruidas por soluciones fijadoras para un corte.
Con qué se conservan los helmintos adultos (gusanos)
Uno suaviza y el otro endurece.
Suaviza: alcohol 70%
Endurece: formol 10%
Qué es AFA
Solución ácido acético - formol- alcohol
Para que se utiliza la solución de AFA
Conservar y preservar ejemplares adultos para su
estudio morfológico, museos o para contar con muestras de referencia.
Cuales son los 8 métodos específicos para parásitos
Parasitoscópico inmediato para
Trichomonas sp (PSC)
Método de...
Graham
Harada – Mori
Baermann
Digestión de carne para larvas de T. spiralis
Triquinoscopía (T. spiralis)
Cultivos para parásitos
Muestras en las que se puede observar de manera DIRECTA (SSF) trofozoítos de Trichomonas vaginalis
fluido vaginal o uretral
Muestra centrifugada en la que se observa Trichomonas vaginal is en su sedimento
Orina 9
Con qué técnicas se tiñen las muestras para observar Trichomonas vaginal
Técnica de Gomori (tricrómica),
Giemsa
Papanicolau
Anaranjado de acridina
Qué parásito se identifica con el método de Graham "cinta adhesiva)
Enterobius vermicularis
En qué método se obtiene la muestra (noche) 2 a 3 horas después que el paciente está dormido, o a la mañana siguiente y sin que se haya realizado el aseo de la región perianal.
Método de Graham (cinta adhesiva)
Para que sirve el método de Harada - Mori
Larvas de uncinarias
Huevos
Cuales son las dos variaciones del metodo de Harada - Mori
En tubo de ensayo
Preparación inclinada en caja petri
Cuantos dias se analiza la muestra del metodo Harada - Mori en TUBO DE ENSAYO
10 días
En este metodo se puede utilizar mayor cantidad de heces, observarse el sedimento en el agua para determinar la presencia de larvas
metodo Harada - Mori en CAJA DE PETRI
Está tecnica permite una buena concentración de larvas vivas de Strongyloides, partiendo de un volumen grande de heces
Método de Baermann
Qué se puede utilizar con el método de Baermann
Embudo de vidrio o vaso de sedimentación
Qué se determina con el metodo de Baermann
Larvas sedimentadas en el fondo
En el proceso se utiliza un liquido parecido al jugo gastrico, el cual digiere los tejidos y deja los parasitos libres
Método de digestión artificial
Qué muestras se utilizan en el Método de digestión artificial
Biopsia o tejidos sin fijar (Ej. babosas veronicélidos, cerebro, pulmón, hígado, etc.).
Para que se utiliza el Método de digestión artificial
Para recobrar larvas de...
T. spiralis (musculo animal o autopsias)
Angiostrongylus costaricensis (tejidos de babosas veronicelidos)
Ventajas del metodo de digestion artificial
Examina mayor cantidad de muestra
Recobra VIVOS (cuando lo estan) quistes, larvas o adultos de tejidos
Método no adecuado para estadios larvados muy recientes o calcificados (muy viejos)
Método de digestión artificial
Qué es el método de Triquinoscopia
Método de compresión para identificar larvas de T. spiralis en tejidos
Qué parasitos se encuentran en muestras biliares y con qué metodo se obtiene
Capsulas de Beal
Giardia lamblia, Isospora belli, Strongyloides stercoralis, Ancylostoma
Qué parasito se cultiva en el medio Pavlova
(B. hominis).
Qué parasito se cultiva en el medio Diamond
(Trichomonas).
Qué parasito se cultiva en el medio de Tanabe y Chiba modificado
Entamoeba histolytica
Qué parasito se cultiva en el medio líquido Roiron
(Trichomonas).
Qué parasito se cultiva en el medio TYI-S-33
(Giardia lamblia).
Menciona los métodos de desarrollo para helmintos
Placas de agar
Agar carbón
Tecnica que permite el desarrollo y diferenciación de nemátodos.
Util para obtener larvas rabditiformes y filariformes de anquilostomídeos y estrongiloideos.
Método de Harada-Mori
Cual es el medio de cultivo para Leishmania spp.
Médio bifásico a base de agar-sangre NNN (Novy-Nicolle-McNeal)
Solucion de Locke
Medio de Senekjie (seneca)
Qué significa ETA
Enfermedades Transmitidas por Alimentos
Cómo se clasifican las Enfermedades Transmitidas por Alimentos
Infecciones
Intoxicaciones
Infecciones mediadas por toxina
Ocurre cuando el microorganismo o las toxinas producidas por bacterias o mohos están presentes en cantidades que afctan la salud
Intoxicación
No poseen olor o sabor y son capaces de causar enfermedad incluso después de la eliminacion de los microorganismos
Toxinas
En qué caso no se considera que es una ETA
En casos de alergia por hipersensibilidad individual (mani, marisos, etc)
Qué se necesita para que ocurra una ETA
Que el patogeno o toxina esten presentes en el alimento
La presencia de patogenos o toxinas en el alimento producen una ETA por si sol@s?
No
Deben estar en cantidades suficientes como para causar una infección o producir toxinas
Qué requisitos son necesarios para que se produzca una ETA
Cantidad suficiente de patogeno/toxina en el alimento
Alimento favorecedor y en zona de peligro durante tiempo suficiente
Ingerir cantidad suficiente de patogeno/toxina que sobrepase la barrera de susceptabilidad
Incidente en el que dos o más personas presentan una enfremedad semejante despues de la ingestión de un mismo alimento donde los estudios epidemiológicos indican que este ultimo es el causante de la enfermedad
Brote de ETA
Qué es un "caso" de Enfermedad Transmitida por Alimentos
Un solo individuo afectado
Cuales son los parasitos que se tranmiten por alimentos
Cryptosporidium
Giardia intestinalis
Cyclospora cayetanensis y Toxoplasma gondii; Trichinella y Anisakis
Diphyllobothrium y especies de Taenia.
Cuales son los alimentos donde se transmiten los parasitos
Pescado, cangrejo y moluscos mal cocidos
Carne mal cocida, plantas acuaticas crudas
Verdura cruda contaminada con heces
Cuales son los sintomas que se pueden presentar en una ETA
Diarrea, dolor abdominal y muscular, tos, lesiones cutáneas, desnutrición, perdida de peso, sintomas neurologicos, etc.
En qué casos es poco práctico actualmente el diagnostico parasitario por microscopio?
Infecciones de baja intensidad, etapas crónicas tardías, etapas expuestas a una determinada hora del día (como filarias).
Este método se basa en la reacción de enlace inmunológico entre los anticuerpos y los antígenos
Inmunodiagnóstico parasitario. Es otro instrumento de diagnóstico aparte del microscopio.
Los análisis que se realizan para medir anticuerpos o antígenos se les denomina….
Inmunoanálisis o inmunoensayos
Cómo funcionan las técnicas de reacción de anticuerpos y antígenos?
Dan origen a un producto aglutinado o precipitado visible
Técnica que carece de sensibilidad
Las técnicas de reacción de anticuerpos y antígenos
Técnica caracterizada por su sensibilidad alta para la detección de antígenos y anticuerpos
Inmunoanálisis
Son basados en reactivos marcados con radionucleidos, enzimas o sustancias fluorescentes
Inmunoanálisis
Cuales son los tipos de pruebas inmunológicas que existen?
Presuntivas, confirmatoria y de referencia
Clases de pruebas (son 2)
Directas. Presencia del antígeno
Indirectas. Huella de presencia que dejó el antígeno, en el huésped.
Técnica que requieren un anticuerpo (antisuero) para
detectar un antígeno especifico del microorganismo buscado
Pruebas de detección de antígenos microbianos.
mediante procedimientos como:
aglutinación
inmunofluorescencia
enzimoinmunoanálisis
o inmunocromatografía.
Los antisueros se obtienen de...
Animales inmunizados con el antígeno
Tipos de inmunoensayos
Western Blot
Inmunoprecipitación (IP)
Radioinmunoensayo (RIA)
Inmunoensayos Enzimáticos (ELISA)
Quimioluminiscencia (CLIA)
Inmunofluorescencia (IF)
Inmunocromatografía
(IHC)
(ICC)
(FC)
Con esta técnica, además de detectar la proteína de interés, se puede determinar su tamaño, confirmar si existen modificaciones post-traduccionales o comparar su concentración en distintas muestras,
WESTERN BLOT
Se utiliza para aislar una determinada proteína del resto de los componentes presentes en una muestra, mediante la precipitación de complejos antígeno-
anticuerpo.
INMUNOPRECIPITACIÓN (IP)
Utiliza isótopos radiactivos para marcar el
complejo antígeno-anticuerpo.
RADIOINMUNOENSAYO (RIA)

Ventaja; Es sensible
Desventaja: Es peligroso el material radioactivo
Uso de enzimas que permitirán la detección de
uniones antígeno-anticuerpo.
Inmunoensayos Enzimáticos (ELISA)

Ventajas: fácil implementación, su
versatilidad y su alta sensibilidad y especificidad.

MAS UTILIZADO EN INVS
la unión antígeno-anticuerpo se mide a través de la
fluorescencia generada mediante una reacción química.
Quimioluminiscencia (CLIA)

Desventaja: Necesitan equipos específicos para la lectura de la fluorescencia, pero más sensibles que ELISA.
La detección del antígeno de interés mediante su unión a un anticuerpo específico se visualiza a través del uso de fluoróforos.
Inmunofluorescencia (IF)
Combina técnica y permite visualizar la distribución y localización del antígeno dentro del tejido en estudio.
INMUNOHISTOQUÍMICA (IHC)
Es una técnica con un fundamento similar a la inmunohistoquímica.
Permiten estudiar el antígeno en el contexto de una célula o un tejido intactos, sin necesidad de aislarlo previamente.
INMUNOCITOQUÍMICA (ICC)
Mide la dispersión y reflexión de un haz de luz láser para contar y analizar células en suspensión en función de sus características físico-químicas.
CITOMETRÍA DE FLUJO (FC)

Es uno de los más complejos
Pruebas de flujo lateral sin necesidad de equipos especializados.
INMUNOCROMATOGRAFÍA
Detecta infecciones tales como Streptococcus b-hemolítico, Chlamydia, virus de la hepatitis, malaria, etc.
INMUNOCROMATOGRAFÍA
La prueba se centra en el antígeno de la proteína rica en histidina II (HRPII).
La prueba BinaxNOW® Malaria
Prueba de INTRADERMOREACCION que se utiliza para el diagnóstico de leishmaniasis
Reacción de Montenegro
Se utilizan anticuerpos adheridos por su región
Fc a partículas grandes de látex que facilitan la
observación
Aglutinación Serológica
se emplea rutinariamente en técnicas de tipado o clasificación de los grupos sanguíneos o en la determinación de las cargas virales.
HEMAGLUTINACIÓN
Cuando un individuo se pone en contacto con un antígeno por primera vez ocurren los siguientes fenómenos que se relacionan con el DIAGNOSTICO SEROLÓGICO
1. Aparición precoz de anticuerpo específico de clase IgM.

2. Aparición algo más tardía de anticuerpo específico de clase IgG.
Los estudios serológicos pueden emplearse fundamentalmente para:
Estudios de diagnóstico

Estudios epidemiológicos
Ejemplos de ESTUDIOS SEROLÓGICOS
Crypto+Giardia Test.
BD Difco Vibrio Cholerae Antisuero Ogawa.
Reacciones febriles.
VDRL
Rosa de bengala
Basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) como primera línea para el diagnóstico de patógenos entéricos en los laboratorios clínicos más modernos, principalmente en Europa y Estados Unidos.
Técnicas moleculares
Tipos de PCR
*dpCR: PCR directa
* nPCR: PCR anidada o semianidada
* PCR-RFLP: PCR asociada al análisis del polimorfismo de longitud de
fragmentos de restricción
*qPCR: PCR en tiempo real
* qPCRm: PCR en tiempo real en formato múltiple
*PCR-LAMP: