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29 Cartas en este set
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Tecnología de DNA recombinante
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Rotura, unión, clonación de DNA, hibridación de an, secuenciacion rápida y seguimiento nivel mRNAgebds
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Genes
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Regiones de una molécula de DNA de gran tamaño como
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Cómo protegen las bacterias sus secuencias propias
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Metilacion de un nucleotido A o C
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Extremos cohesivos
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Fácil unión
Produciendo DNA recombinante |
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Gel poliacrilamida
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10-500 nucleotidos
Diferencias de 1 nucleotido |
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Gel de agarosa
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Separar moléculas de DNA de doble hebra
300-10.000 pares nucleotidos |
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Electroforesis en gel de campo pulsante
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-220.000-1.000.000
-Alta frecuencia en campo eléctrico -reorientation más lenta a mayor tamaño *se cortan con nucleasas de restricción |
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Tincion com bromuro de etidio
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Emite fluorescencia con luz UV
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Radioisotopo (32P)
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Incorporado en P del DNA y emite partículas B detectado por autorradiografia
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DNA polimerasa copia DNA con nucleotidos marcados
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Se generan sondas de DNA para hibridacion de AN
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Enzima polinucleotido quinasa
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De bacteriofago
Transferir sólo un P desde ATP a extremo 5’ |
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Doble hélice— >hebras
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100 grados
pH >13 Desnaturalización DNA |
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2 hebras—>doble hélice
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65 grados
Tiempo prologando Hibridacion o renaturalizacion de DNA |
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Sonda
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Moléculas de DNA sencillas
Contiene marcadores Decretar 15-millones nucleotidos |
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Primeros pasas en transferencias
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Obtención célula
Disgregación en detergente Separación DNA y RNA Separación RNA y mRNA |
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Transferencia Northern
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RNA
1 separado x electroforesis 2 replica patrón bandas RNA (nailon o nitrocelulosa) 3 incubación (con sonda) 4 hibridacion 5 localización |
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Transferencia Southern
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Analiza DNA
1 se corta DNA 2 separación x electroforesis 3 transferencia e hibridacion |
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Clonación DNA
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Realizar copias idénticas de DNA
Aislamiento de fragmentos de DNA |
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Clonación realizada principalmente por...
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Vectores de Clonación
Virus o plasmideos |
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Biblioteca de DNA
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Colección de fragmentos de DNA clonado
Se mantiene en células de bacterias |
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Vectores plasmó dichos
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Pequeñas moléculas de DNA de doble cadena
Purificados-cortados-union (DNA ligasa)-transfeccion-replicacion 1000/30000 pares de bases |
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YAC
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Cromosoma artificial de levadura
Transportar fragmentos largos de DNA |
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Plasmido F
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De E Coli
300.000/1.000.000 pares de bases 1/2 copias, más estabilidad |
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BAC
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inserción de fragmentos mayores cubren al genoma completo con menor número de colonias
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Biblioteca de DNA genomica
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Colección completa de plasmideos
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Clon cDNA
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Se extraen ciertos mRNA
Copia de cDNA |
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Transcriptasa reversa
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Sintetiza cadena de cDNA sobre molde de RNA
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DNApolimerasa
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1 cadena se transforma en doble cadenavwntaba
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Ventajas de cDNA
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Contiene secuencias ininterrumpidas de un gen
Representa todos los mRNA procesados |
