Pruebas Bioquímicas Para Identificación De Microorganismos

CONSULTAR EN CLASE
I. Para separar Bacilos Gram (-) de Cocos Gram (+) en acumulo utilizaria:
para los Cocos gram positivos en acúmulo
Catalasa
Agar Sangre
Bacitracina, si da resistente y quiero diferenciar staphylococos aureus de SCN:
ADN, Coagulasa y Manitol Salado.

Para Bacilos Gram (-)

La coloración más utilizada es la de Gram. La misma se realiza en los siguientes pasos:
1. Realizamos un frotis con las bacterias a teñir:
Para eso ponemos una gota de AGUA sobre un PORTAOBJETOS y luego con ASA ESTERILIZADA tomamos una muestra de un cultivo y la esparcimos sobre el portaobjetos.

2. Dejamos secar y fijamos las bacterias con calor:
Puede hacerse con la ayuda del mechero, evitando que la muestra se caliente demasiado y siempre con la muestra mirando hacia arriba.

3. Cristal violeta por 1 minuto

4. Lavamos (si eliminar todo) con Agua

5. Lugol por 30 segundos:
Actúa como "mordiente" es decir que fija el colorante

6. Volvemos a lavar con agua

7. Agregamos alcohol 96 grados por 15 segundos:
para que se produzca la decoloración de las bacterias Gram negativas. Las Gram positivas permaneceran de color violeta.

8. Lavamos con agua

9. Agregamos safranina por 1 minuto:
Tiñe a las bacterias gram negativas

10. Lavamos con agua y dejamos secar

COCOS GRAM (+) EN ACÚMULO
Micrococcus:
- Catalasa: Daría positivo (burbujeo)
- Agar sangre: por si acaso pero debería dar gamma hemolítico.
- Bacitracina: Sensible

COCOS GRAM (+) EN CADENA:
Enterococo spp:
- Catalasa: (+) es decir burbujeo
- Agar Sangre: Gamma hemólisis
- Agar de Bilis esculina: (+) Es decir que cada spot debe ponerse *****.
- ClNa: (+) Se desarrolla, es decir se genera turbidez.

Staphylococcus aureus:
- Catalasa: Daría positivo (burbujeo)
- Agar sangre: por si acaso pero debería dar gamma hemolítico.
- Bacitracina: Resistente
||
Como dio resistente:
* DNAsa: (+) (colonias rodeadas por zona clara)
* Coagulasa: (+) (Formación de coágulo)
* Manitol Salado: (+) (medio torna a color amarillo)

- Catalasa: Daría positivo (burbujeo)
- Agar sangre: por si acaso pero debería dar gamma hemolítico.
- Bacitracina: Resistente
||
Como dio resistente:
* DNAsa: (-) No hay zona clara al rededor de las colonias.
* Coagulasa: (-) NO HAY Formación de coágulo
* Manitol Salado: (+/-) Cuando da positivo es amarillo cuando da negativo es rosado.

- Catalasa: (+) Burbujeo
- Agar Sangre: Hemólisis total - Beta Hemólisis
- Agar Bilis esculina: (-) Es decir que no hay cambio de color en el medio.
- ClNa: (-) no hay turbidez
- Bacitracina: S o R

- Catalasa: (+) Se genera burbujeo
- Agar Sangre: Alfa hemólisis, o hemólisis parcial
- Agar Bilis esculina: (-) no se generan spot de color *****.
- ClNa: (-) no se genera turbidez
- Optoquina: Sensible, se genera halo de inhibición

Es importante obtener colonias aisladas para así poder ver el desarrollo de las mismas, ya que en una misma placa tendremos diferentes tipos de colonias correspondientes a los diferentes microorganismos presentes en la población original.