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Principales tecnicas de laboratorio
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1.Principales coloraciones
2.Principales pruebas bioquímicas 3.Principales pruebas Inmunológicas 4.Metodos de deteccion de á.nucleicos |
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Principales coloraciones
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1.Gram
2.Ziehl-Neelsen |
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Coloracion de Gram
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Permite distinguir morfología y disposicion bacteriana.
Fundamento: Union de Cristal violeta, a los ácido y ribonucleatos de Mg de la pared. Tecnica: 1.Extendido y fijacion por flameado. 2.Coloracion con Cristal de Violeta (2'); 3.Mordiente: Lugol (1'); 4.Contracolorante: Fuscina o Sarfarina (30") |
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Coloracion de Ziehl-Neelsen
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Tincion para BAAR
Fondamento: Unino de fuscina fenucada de Ziehl a á.micolicos de la pared. Técnica: 1.Extendido y fijacion; 2.Colorante: Fuscina fenicada de Ziehl (5'); 3.Mordiente: Calor por flameado y lavado con agua; 4.Decolorante: alcoho-acido, lavar con agua; 5.Contracolorante: Azul de metileni (1-3') lavar con agua. |
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Principales pruebas Bioquimicas.
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1.Prueba de la Catalasa
2. Prueba de la Oxidasa 3. Prueba de la Optoquina 4. Sensibilidad a Bacitracina 5. Hidrolisis de Hipurato 6. Reaccion de Quellung 7. Prueba de CAMP 8. Solubilidad en Bilis al 40% 9. Prueba de Bilis esculina 10. Prueba de PYR |
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Prueba de Catalasa
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enzima que libera O2 a partid de H2O2, Staphylococcus (+) "burbujas" y Streptococcus (-)
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Prueba de la oxidasa
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Si hay Citocromo-oxidasa el Tetrametilo-p-fenilediamina, produce color. Neisseri (+) color rosado q puede virar a *****. Moraxella (-) no hay cambio de color.
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Prueba de la Optoquina
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Fragilidad de la membrana celular a clorhidrato de etilhidrocupreína. S.pneumoniae (+) se lisa y hay un halo de inhibicion del disco optoquina.
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Sensibilidad a Bacitracina
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identifica S.Pyogenes de los otros Streptococcus, porque es inhibido por 0,04U de Bacitracina
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Hidrolisis del Hipurato
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S.agalactiae sintetiza la hipuricasa, enzima que hidrolisa hipurato de sodio y forma un precipitado.
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Reaccion de Quellung
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Ac especificos q inchan la capsula, se ve con azul de metileno
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Prueba de CAMP
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el factor CAMP interacciona con Estafilococus intensificando la activudad hemolitica. S.agalactiae produce dicho factor.
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Solubilidad en Bilis al 40%
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La sales biliares lisan S.pneumonia
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Prueba de bilis esculina
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Capacidad de hidrolisar esculina en presencia de bilis de Enterococcus. Se produce oscurecimiento.
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Prueba de PYR
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Capacidad de hidrolisar ĺa pirrolidonil-aril-amidasa en menos de 30'. (+) en cocos gram positivos, catalasa negativo: grupo A y D.
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Principales pruebas Inmunológicas
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1. Inmunomarcacion
2. Enzimoinmunoensayo (ELISA) 3. Radioinmunoensayo (RIE) 4. Inmunofluorescencia (IF) 5. Reaccion de neutralizacion 6. Inhibicion de la Hemoaglutinacion 7. Fijacion del complemento |
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Inmunomarcacion
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Ac (maracados) a muestra problema, para observar a ME, se usa en particulas virales.
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ELISA
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Se basa en la formacion de AgAc uno conocido, y revela la union por antocuerpos marcados con (peroxidasas), previo agregado del sustrato.
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RIE
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Se basa en la union AgAc uno emite rediacion
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IF
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Se basa en la union AgAc uno emite fluorescencia.
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Reaccion de neutralizacion
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Se basa en la inhibicion del efecto citopatico producido por un virus en un cultivo, al enfrentarlo previamente con ac neutralizantes.
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Inhibicion de la Hemoaglutinacion
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Se basa en la inhibicion de la agultinacion de eritrocitos por un virus productor de hemaglutinina, al enfrentarlo a ac antihemaglutinina.
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Fijacion del Complemento
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Se basa en la inhibicion de la lisis de eritrocitos marcados con ac producida por el sistema de complemento, al enfrentarlos previamente a un virus que forma el comolejo AgAc, que unen complemento.
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Metodos de deteccion de á. nucleicos
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1. Electroforesis
2. Hibridacion 3. PCR |
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Electroforecis
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Reconocimiento de corrida electroforetica de ciertos genomas.
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Hibridacion
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Se basa en la capacidad de á.nucleicos de desnaturalizar y renaturalizarse ante cambios de t°. Se enfrenta uno desconocido y otro conocido y marcado con enzimas o radiacion, y se observa si se produce la union por complementariedad.
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PCR
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Amplifican secuencias de ADN
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